产品介绍：HepSFM1培养基是专门针对肝脏细胞体外培养的无血清培养基，适合肝脏细胞贴壁培养，包含氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素和生长因子等，含有L-谷氨酰胺，一般无需额外添加。经测试，多种肝脏细胞可以在该培养基中生长，本品不含抗生素。

产品名称	货号	规格	价格
HepSFM1肝细胞培养基	SH001	500mL	1420.00

应用范围：适用于科研和基于细胞培养的大规模生物制品的生产，不可直接作为药物使用。

储运方法及效期：储存：2-8℃冷藏；运输：常温；有效期：12个月。

培养条件：37℃，5% CO₂湿润培养条件。

注意：请使用正确的无菌操作技术，最好在II级A2型生物安全柜中操作。

细胞复苏

1.准备一个37℃水浴。

2.从液氮储存罐中取出装有冷冻细胞的冻存管，并立即将其放入37℃的水浴中。

3.在37℃水浴中轻轻旋转冻存管，快速解冻细胞（<1分钟），直至管中只剩下少量冰。

4.将冻存管转移到生物安全柜中。打开前，使用70%乙醇小心擦拭冻存管外部。

5.打开管盖，小心将解冻的细胞转移到已经加有5ml培养液的15ml尖底离心管中。

6.200×g离心5-10分钟收集细胞。实际离心速度和持续时间因细胞类型而异。

6.离心后，检查上清液的澄清度和完整团块的可见性。在不干扰细胞团块的情况下，无菌吸掉上清液。

7.加入1ml的新鲜培养液，轻轻地将细胞重悬于培养基中，然后将其转移到适当的培养瓶中，置于二氧化碳培养箱中培养。

细胞传代

1.从二氧化碳培养箱中取出长满细胞的培养瓶，吸掉陈旧的细胞培养液。

2.在生物安全柜中，使用不含钙和镁的平衡盐溶液（DPBS，D-Hanks）洗涤细胞（每10cm²培养表面积需约2 mL）。向培养瓶附着细胞层的对侧缓慢添加平衡盐溶液，以避免干扰细胞层，并来回摇动数次培养瓶。

3.无菌条件下，吸掉平衡盐溶液。

4.向培养瓶一侧添加预热的胰酶溶液；使用足够的试剂覆盖细胞层（每10cm²约需0.5 mL）。轻轻摇动容器以完全覆盖细胞层。

5.将培养瓶在室温下胰酶消化约2分钟。请注意，实际胰酶消化时间随细胞系不同而异。

6.不时在显微镜下观察细胞是否解离。如果细胞脱离不到90%，则继续孵育，每隔30秒检查解离状况。轻轻摇晃培养瓶可加速细胞解离。

7.当90%的细胞已解离时，添加2倍体积（解离试剂体积的两倍）的预热完全生长培养基以终止或减弱消化反应。吹吸液体从培养瓶表面吹下细胞。细胞悬液以分散细胞，从细胞层表面分离培养基。

8.将细胞转移到一个15 mL的尖底离心管中，200×g离心5-10分钟收集细胞。请注意，离心速度和时间因细胞类型而异。

9.将细胞团块重悬在最小体积的预热完全生长培养基中，取出样品进行计数。

10.使用血细胞计数仪、细胞计数仪、台盼蓝排染法或Countess^TM 3自动细胞计数仪，测定细胞总数和活细胞百分比。

11. 将细胞悬浮液用新鲜培养液稀释至合适密度接种。（推荐按照1-5×10⁴细胞/cm²密度进行接种），然后将传代好的细胞放回培养箱中。

注意: 如果使用培养瓶，在将其放回培养箱之前，如您使用的不是带透气盖的透气培养瓶，请先打开瓶盖，以便进行充分的气体交换。不建议剧烈摇动培养瓶，因为这可能会损伤细胞。

细胞冻存

1.选择处于对数生长期的细胞进行冻存。汇合度达到80%左右，细胞活率大于90%。

2.细胞冻存选择合适的程序降温冷冻盒(如Nalgene公司的Mr.Frosty梯度程序降温冷冻盒)。按照操作说明，提前加入适量异丙醇置于2-8℃预冷。

3.小心吸取细胞培养上清到一个新的15ml离心管中，100×g离心10min收集条件培养液，转移到另一个新的15ml离心管中，用于配制细胞冻存液。

4.配制细胞冻存液：新鲜培养基和条件培养液冻存液等体积混合，然后加入DMSO到终浓度为7.5%。配好的冻存液后置于2-8℃保存。。

4.按照细胞传代中的方法消化细胞，100×g 离心5-10 min收集细胞，去掉上清，补加细胞冻存液。按照密度计算所需的冻存液体积， 最终的冻存的细胞密度为1-5×10⁶ 细胞/mL。

6.将细胞悬浮液等分至低温冻存管中。轻轻混合细胞以保持细胞悬浮液均匀。

7.将冻存管放到预冷的梯度程序降温冻存盒中,转移冻存盒到 -80℃超低温冰箱中。

8.将装有细胞的冻存管转移到液氮罐中保存。